各类型试剂盒的原理：管式试剂流水线式的反应流程大幅提高了检测速度，但是无法像板式试剂一样方便地进行原料包被。于是高通量的试剂引入了包埋有四氧化三铁的微球，即超顺磁性微球。与板式试剂的微孔不同，这些微球表面往往进行了进一步处理，带有不同的活性基团比如羧基、氨基、...

逆转录的过程：生物体中的逆转录过程就比较复杂，比如逆转录病毒（retrovirus）。病毒是真正的“极简风”，所有东西都压缩到非常。比如它的基因组中，经常有些基因是重叠、嵌套结构，充分利用每一个碱基。所以它也不会专门编码一个引发酶来合成引物，它一般是在组装时带...

试剂盒生产流程：包被：1、包被前预吸检查头头是否合格，水流是否一同，不一同者应geng换头头，包被应选用好的头头，每包被一块板，应将头头套紧，并且在包被的过程中要留意检查吸液是否一同，在包被过程中若出现任何小问题，都应将此块板做出记号，以便后期组装入库时筛选。...

在进行DNA提取之前，需要确保样本的质量良好。其次是样本的保存方式。不同的样本类型有不同的保存要求，例如，血液样本需要在低温下保存，而唾液样本可以在室温下保存。正确的样本保存方式可以确保提取到高质量的DNA。综上所述，DNA提取所需的样本类型和数量是影响提取成...

人体中也有逆转录过程，比如端粒的复制。端粒（telomere）是染色体末端的特殊结构，由重复的DNA序列（TTAGGG）和核的蛋白组成，可以保护染色体末端，维持基因组完整性。端粒的末端是单链3'末端，形成一种紧凑的T环结构，可保持其稳定性。其表面覆盖着Shel...

该如何选择高质量、使用方便和廉价物美的试剂盒？准确度的测定：通常用回收实验来衡量试剂盒的准确度。作回收实验时，回收值不得超出线性范围，回收率一般要求在100%±5%以内。对于一些无法准确加入的待测物（如酶和一些难以得到的标准待测物）也可以用对比实验加以衡量。方...

RT-PCR就是逆转录PCR或称为反转录PCR（Reversetranscription-PCR，RT-PCR），是以RNA为材料应用于PCR扩增中的一种实验方法。首先通过逆转录酶将总RNA或信使RNA（mRNA）转录成互补DNA（cDNA）。其次TaqDNA...

探针法qPCR试剂盒使用方法：稀释标准曲线样品（以10E2-10E7拷贝/μL这6个10倍稀释度为例）1.由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在单独的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性的病原本产品不提供活...

外泌体试剂盒原理：传统的外泌体研究，基本都是用WB之类来检测和表征外泌体，比如用SDS-PAGE电泳可分析Exosome中蛋白的大致含量及种类（通过条带的位置和条带的粗细）；Western-Blot可以检测Exosome中某特定蛋白的表达情况，就跟我们检测其他...

分离外泌体的方法之超滤：样品通过0.2μm聚醚砜（PES）膜过滤，较大的颗粒物质（如细胞碎片和凋亡体）被滞留出来。然后，包括外泌体在内的半处理滤液样品通过TFF系统通过500kDa截止滤芯进行超滤过程，进料流速为120mL/min，跨膜压力10:1，外泌体太大...

反转录酶的选择：反转录酶（Reversetranscriptase）又称逆转录酶。是以RNA为模板指导dNTP合成互补DNA（cDNA）的酶。一部分反转录酶具有RNA酶活性，能够在转录后降解RNA-DNA杂交链中的RNA链。如果反转录酶没有Rnase酶活性，可...

外泌体可以传递生物分子，例如蛋白质、DNA、mRNA等，影响接收器细胞的表现型和生理活性。外泌体可通过特定的组装和功能修饰，提高其对宿主细胞的选择性靶向性。核酸是在外泌体中发现的另一组主要颗粒，即DNA和RNA，它们可以在细胞中发挥功能作用。在源自小鼠和人类肥...

反转录酶的注意事项，随机引物：适合各种RNA的RT，尤其适合模板丰度很低的情况（比如某个gene表达量很低）。选择随机引物时，首先链cDNA合成反应中就是以所有的RNA为模板，然后进行PCR反应时设计引物进行特异性扩增。同时要注意随机引物的量和总RNA量之间的...

RT-PCR就是逆转录PCR或称为反转录PCR（Reversetranscription-PCR，RT-PCR），是以RNA为材料应用于PCR扩增中的一种实验方法。首先通过逆转录酶将总RNA或信使RNA（mRNA）转录成互补DNA（cDNA）。其次TaqDNA...

生物试剂Tetraspanins是常见的外泌体标志物。它们包括CD9、CD63和CD81膜蛋白。Tetraspanins参与外泌体的产生。在抗原呈递细胞中，MHC-II分子的功能通过它们整合到富含四跨膜蛋白CD9的细胞质膜区域中来调节。CD63外泌体蛋白被认为...

miRNA加尾法逆转录：miRNA，即microRNA，是一类非常短的RNA分子，只有几十到几百个核首酸，在正常细胞存活期间会产生大量的miRNA。miRNA起着重要的抑制作用，它可以抑制特定mRNA的表达以及细胞中内含物翻译和转录等功能他们是催化机制，负责影...

外泌体的构成：外泌体富含胆固醇和鞘磷脂。2007年，Valadi等发现鼠的肥大细胞分泌的exosome可以被人的肥大细胞捕获，并且其携带的mRNA成分可以进入细胞浆中可以被翻译成蛋白质，不只是mRNA，exosomes所转移的microRNA同样具有生物活性，...

骨组织RNA提取之其它骨组织破碎方法：取出吸附柱RA，放入一个RNasefree离心管中，根据预期RNA产量在吸附膜的中间部位加30-50μlRNasefreewater（事先在70-90℃水浴中加热可提高产量），室温放置1分钟，12,000rpm离心1分钟。...

该如何选择高质量、使用方便和廉价物美的试剂盒？生化诊断试剂盒的质量是保证实验室检测结果准确性的关键因素之一。目前，由于临床生化自动分析仪器的普及应用，商品化的不断涌现。因此，如何选择和评价高质量的、符合实验室分析要求的，以及使用方便和价廉的试剂盒，不只是检验工...

如何选择DNA提取试剂盒？细胞系VS生物体：1、植物：当涉及到植物DNA分离时，必须考虑到其他一些因素，需要注意污染物的去除。植物在纯化过程中通常含有未分离的糖，因此，洗涤剂选择性地与DNA结合并从溶液中析出，通常是先将洗涤剂溶解在高浓度的盐溶液中，然后提取D...

microRNA提取方法及步骤：动物组织（例如鼠肝脑）a.新鲜组织用解剖刀迅速切成小碎块,根据处理组织的质量，按照50-100mg加入1ml的比例加入Lysis/Bindingbuffer后电动或者手动彻底匀浆。或者在液氮中研磨组织成细粉后，取适量组织细粉（约...

逆转录引物：加尾法逆转录引物的结构并不是想象中那么简单的oligodT，其包含三个关键结构：①为了与PolyA序列互补配对，OligodT序列必不可少。②在OligodT序列的5端，存在一段通用序列，用于qPCR过程中反向引物与cDNA的结合。③OligodT...

样本数量是RNA提取的重要考虑因素。样本数量的选择应根据实验目的和所需的RNA浓度来确定。一般来说，样本数量越多，提取到的RNA量越多，但可能导致RNA的稀释和降解。因此，我们需要根据实验需求和样本的可获得性来确定合适的样本数量。对于细胞样本，通常需要提取至少...

血浆DNA与血浆游离DNA提取试剂有较高的提取得率。DNA核酸提取得率的确定，常用的是使用紫外分光光度计的方法。但是，血清、血浆dna样本中游离核酸含量较低，如果直接用紫外法检测，得出的数值并不准确，而且多次测量的结果会变异很大。关于提取得率，Qiagen的研...

热启动酶试剂盒：是预混的含有优化浓度的高纯度HotStartTaqDNA聚合酶，dNTPs，Mg2+，反应缓冲液和稳定剂等成分的即用型2倍浓度的PCR溶液。该产品使用方便，扩增性能强，特异性好，适合大规模基因检测、多重PCR、半定量PCR实验和微量DNA模板的...

逆转录的端粒复制：逆转录经常与细胞恶性转化有关，艾滋、乙肝等很多疾病也有逆转录过程。所以相关研究可以为很多疾病的研究和防治提供帮助。逆转录酶抑制剂就一直是药物研发热点，例如抗HIV的nevirapine。逆转录酶缺乏校对（3'-5'核酸外切酶）功能，所以容易出...

逆转录的转录过程：基因的转录是由RNA聚合酶催化进行的。基因的上游具有结合RNA聚合酶的区域，叫作启动子。启动子是一段具有特定序列的DNA，具有和RNA聚合酶特异性结合的位点，决定了基因转录的起始位点。RNA聚合酶与启动子结合后，在特定区域将DNA双螺旋两条链...

在DNA提取质量评估中，有一些标准可以用来判断DNA的质量。首先是纯度，即DNA样品中是否存在污染物。纯度可以通过比色法或荧光定量来评估，纯度值应该接近1.8-2.0。其次是完整性，即DNA是否受到降解。完整性可以通过电泳分析或PCR扩增来评估，完整的DNA应...

DNA提取的基本步骤：1.细胞裂解与细胞裂解缓冲液裂解细胞膜；2.脂质被洗涤剂和表面活性剂分解；3.通过添加蛋白酶消化蛋白质；4.通过添加RNase消化RNA；5.通过加入浓盐然后离心分离细胞碎片、消化蛋白质、脂质和RNA；6.用冰冷的乙醇或异丙醇乙醇沉淀DN...

DNA提取的原则：1.保证核酸一级结构的完整性；2.核酸样品中不应存在对酶有抑制作用的有机溶剂和过高浓度的金属离子；3.其他生物大分子如蛋白质、多糖和脂类分子的污染应降低到较低程度；4.其他核酸分子，如RNA，也应尽量去除。DNA提取的样品准备：生物组织：一....