该如何选择高质量、使用方便和廉价物美的试剂盒？生化诊断试剂盒的质量是保证实验室检测结果准确性的关键因素之一。目前，由于临床生化自动分析仪器的普及应用，商品化的不断涌现。因此，如何选择和评价高质量的、符合实验室分析要求的，以及使用方便和价廉的试剂盒，不只是检验工...

细胞外泌体的来源和表征方法：细胞外泌体是直径为30-150nm的血管外囊泡亚群。在过去的20年里，科学家已经从包括正常细胞和病细胞在内的许多细胞类型中分离出外泌体，并且研究了它们对其他细胞的影响。外泌体是由多种大分子组成，例如核酸、蛋白质和脂质。细胞外泌体具有...

DNA提取的基本步骤：1.细胞裂解与细胞裂解缓冲液裂解细胞膜；2.脂质被洗涤剂和表面活性剂分解；3.通过添加蛋白酶消化蛋白质；4.通过添加RNase消化RNA；5.通过加入浓盐然后离心分离细胞碎片、消化蛋白质、脂质和RNA；6.用冰冷的乙醇或异丙醇乙醇沉淀DN...

试剂盒是用于盛放检测化学成分、药物残留、病毒种类等化学试剂的盒子。它一般在医院、制药企业使用。试剂盒使用示例：试剂盒的产生正是为了使实验人员能够摆脱繁重的试剂配制及优化过程，所以试剂盒中一般配备有相应的使用说明书，用户按照说明书只需少量的优化即可得到满意的结果...

磁珠法提取DNA提取方法：实验步骤，磁珠法核酸提取一般可以分为四步：裂解——结合——洗涤——洗脱。裂解：核酸必须从细胞或其他生物物质中释放出来，细胞裂解可通过机械作用、化学作用、酶作用等方法实现。其中，酶作用主要是通过加入溶菌酶或蛋白酶（蛋白酶K、植物蛋白酶或...

人体中也有逆转录过程，比如端粒的复制。端粒（telomere）是染色体末端的特殊结构，由重复的DNA序列（TTAGGG）和核的蛋白组成，可以保护染色体末端，维持基因组完整性。端粒的末端是单链3'末端，形成一种紧凑的T环结构，可保持其稳定性。其表面覆盖着Shel...

RNA逆转录实验注意事项：RNA定量：除了掌握RNA的完整性之外，反转录之前还需要对RNA浓度进行测定。一般反转录试剂盒会对上样量有要求，建议totalRNA上样量小于5μg。超过这个范围，会使反转录产物产生偏好性(表达丰度高的基因优先被反转录)而造成定量结果...

RNA提取的步骤和流程：RNA纯化。RNA纯化是将破碎后的样品中的RNA分子与其他杂质分离开来。常用的方法有酚/氯仿法、硅胶柱法和磁珠法等。酚/氯仿法是将样品与酚和氯仿混合，通过离心分层的原理将RNA分子分离出来；硅胶柱法是利用硅胶柱的亲和性吸附特性将RNA分...

分离外泌体的方法之超滤：它使用孔径为50-450nm的膜过滤器从细胞碎片和较大的EV中分离外泌体。通过使用纳米尺寸的滤膜，可以分离出目标尺寸的外泌体。超滤法通常用作超速离心的后续步骤，以及凝胶过滤和色谱的较后一步。超滤可以通过切向流过滤（TFF）或直流过滤（D...

各类型试剂盒的原理：首先是免疫比浊试剂。免疫比浊的原理与免疫试剂相同，是通过抗原-抗体的特异性反应来进行检测。只不过免疫比浊试剂中没有指示试剂来表征反应结果，而是通过宏观上的反应复合物微粒（或沉淀）形成后造成体系浊度（吸光度）的变化来进行检测。使用光线通过反应...

使用差速离心法分离外泌体主要需要注意的是转子的选择。“摆动桶”(SW)转子和“定角”(FA)转子，这些转子的几何形状根本不同，因此沉降特性也不同。这些转子之间的主要区别在于：FA转子，与旋转半径相比，沉积颗粒的较大路径长度通常较小，允许近似恒定迁移率并简化描述...

逆转录常见问题及解决方法之组织提取：RNAisolater可以提取miRNA吗?可以提取miRNA。他普遍适用于培养细胞、动物组织、微生物以及代谢较少的植物组织，如幼苗、幼叶等。提取的RNA有基因组DNA污染：a)、向裂解液中加入氯仿后，需要在低温下(2-8°...

茎环法试剂盒使用注意：1）较佳RT引物浓度依据具体实验而定，引物浓度范围可在200nM～800nM之间优化；2）RT反应结束后请立即将cDNA产物取出，快速置于冰上冷却；3）内参引物（U6，5S等）的使用与miRNA的检测方法一致。miRNAqPCR反应：1）...

探针法qPCR试剂盒使用方法：数据处理：1、如果把本试剂盒用于定量检测，则以阳性对照浓度的log值为横轴，以Ct值为纵轴，绘制标准曲线。再以待测样品的Ct值从标准曲线上推算出样品RNA浓度的log值，再推算出其浓度。2、如果把本试剂盒用于定性检测，只判断阳性或...

分离外泌体的方法之静水过滤透析：它主要有助于将整个EV从高度稀释的溶液中分离出来，而无需超速离心过程。280Musante等人展示了用于从尿液样本中分离EV的HFD方案。在HFD的初始步骤中，用2000×g离心样品以去除细胞，细菌和碎片作为沉淀。然后，将上清液...

CHO细胞外泌体的分离和表征：CHO细胞是一种普遍用于生物制药蛋白质生产的宿主。CHO细胞中分离外泌体主要采用聚合物的沉淀(PBP)技术从分批培养中分离和富集细胞外泌体囊泡。分离后的外泌体可以通过多种方法来检测和表征分离的囊泡，这些分析包括动态光散射(DLS)...

RNA提取的步骤和流程：是RNA质量检测。在提取到RNA后，需要对其进行质量检测，以确保提取到的RNA分子质量良好。常用的方法有凝胶电泳、比色法和荧光定量等。凝胶电泳是将RNA样品与DNA标准品一同加载到琼脂糖凝胶中，通过电场的作用将RNA分子分离出来，然后通...

逆转录酶的质量控制：1.切口酶：在与200单位酶37oC保温60分钟后，超螺旋质粒保留在90%以上。2.DNase测定：200单位酶与50ng3H-DNA37oC保温60分钟，分解出的放射性低于1%。3.RNase测定：200单位酶与50ng3H-RNA37o...

各类型试剂盒的原理：进行检测时，反应后洗涤微孔，就可以将体系中多余的物质去除，微孔中只留下吸附在其上的原料和相应的免疫复合物。此后可以采用多种指示方法进行检测。板式试剂来源于实验室，较初是为了提高手工反应的效率而设计，现在也有自动化设备进行操作。板式试剂的特点...

试剂盒生产流程：1、将包被抗原用包被缓冲液制作包被液，每孔取100mL参加酶标板，盖好盖板膜，包被条件如下表，4℃16-20h包被时酶标板可以叠放，而37℃2h包被时酶标板之间的距离应保持一同（一般为5cm）。依据培养箱的规划调度酶标板间的距离，如培养箱从底部...

逆转录的端粒复制：逆转录经常与细胞恶性转化有关，艾滋、乙肝等很多疾病也有逆转录过程。所以相关研究可以为很多疾病的研究和防治提供帮助。逆转录酶抑制剂就一直是药物研发热点，例如抗HIV的nevirapine。逆转录酶缺乏校对（3'-5'核酸外切酶）功能，所以容易出...

外泌体的分离方法：目前，有许多可用的外泌体分离方法。比较传统的外泌体分离方法是超速离心，许多人将其视为金标准。其他技术主要基于大小排阻或抗体介导的标记外泌体分离。每种分离方法在纯度、数量、效率和通量方面都不同。超速离心法分离法的缺点是外泌体结构容易发生改变，造...

茎环法逆转录技术具有许多优点。首先，该技术可以在样品数量较少的情况下扩增RNA分子，从而避免了RNA样品的纯化和浓缩操作。其次，茎环法逆转录技术可以特异性地扩增目标RNA分子，避免了随机引物引起的非特异扩增，从而提高了检测的准确性和可靠性。此外，茎环法逆转录技...

microRNA提取方法及步骤：室温放置5分钟以充分分离核酸蛋白复合物。加入200μl氯仿，剧烈振荡15秒。室温放置2-3分钟，13，000rpm离心10分钟。小心取上清（约600μl）转入到新的离心管，加入1.5倍体积的无水乙醇（必须是室温的，通常900μl...

各类型试剂盒的原理：进行检测时，反应后洗涤微孔，就可以将体系中多余的物质去除，微孔中只留下吸附在其上的原料和相应的免疫复合物。此后可以采用多种指示方法进行检测。板式试剂来源于实验室，较初是为了提高手工反应的效率而设计，现在也有自动化设备进行操作。板式试剂的特点...

当外泌体在1983年头次被发现后，其被认为是细胞排泄废物的一种方式，如今随着大量对其生物来源、其物质构成及运输、细胞间信号的传导以及在体液中的分布的研究发现外泌体具有多种多样的功能。外泌体的功能取决于其所来源的细胞类型，其可参与到机体免疫应答、抗原提呈、细胞迁...

逆转录酶实验流程：从细胞材料中提取RNA→RNA加入到含有逆转录酶、引物、dNTPs的反应体系中→退火，引物与RNA链配对→延伸，逆转录酶合成互补cDNA链变性→常规PCR反应流程（变性、退火、延伸，如此多次循环）。RT-PCR“两步法”与“一步法”RT-PC...

活性蛋白提取试剂盒含有的独特配方能够溶解细胞膜包括细胞质膜和核膜。提取的蛋白可用于WesternBlotting、蛋白质电泳、免疫共沉淀、酶活测定等下游蛋白研究。特点：1、使用方便，从细胞，组织中提取蛋白不需经过研磨、反复冻融、超声破碎等前处理。2、将蛋白提取...

外泌体的提取主要包括以下几种方式：一是色谱法，这种方法分离到的外泌体在电镜下大小均一，但是需要特殊的设备，应用不普遍。二是微流控分离法，该方法通过负压及震荡等机械原理分离外泌体，产量纯度均具有较大幅度提高，但需要特定设备配合。外泌体分离方法之纳米粒径分析法：确...

RNA提取和DNA提取实验中常见问题及过程中的注意事项：降解：降解问题是RNA制备中常常到的问题。因为在RNA提取过程中，样品储存不当或裂解效率低等情况都会导致降解。对于DNA提取，降解不是一个大问题，因为对于PCR，DNA可以被剪切并且工作正常，如果不希望有...