miRNA的加尾法逆转录和qPCR，miRNA与mRNA不同，成熟的miRNA的长度只有20nt左右，非常短，通常正向引物就足以覆盖其全长甚至有余，反向引物就无处安放了。那么如何实现miRNA的qPCR扩增呢？解决方案就是在逆转录的时候设法增加逆转录产物长度。普遍的方法有两种，加尾法和茎环法。经过加尾法或茎环法这种特殊的逆转录形式处理之后，得到的cDNA长度从原始的20nt增加到80nt以上，这样就能够实现miRNA的qPCR扩增了。RNA逆转录实验注意事项：选择合适的引物：但其对RNA的完整度和二级结构的要求较高，而且不适用于原核生物。随机引物可以根据碱基情况结合到几乎所有的RNA上，包括m...

反转录酶(reversetranscriptase,也可写成逆转录酶)又称为依赖RNA的DNA聚合酶。1970年Temin等在致死RNA病毒中发现了一种特殊的DNA聚合酶，该酶以RNA为模板，以dNTP为底物，tRNA(主要是色氨酸tRNA)为引物，在tRNA3'-OH末端上，根据碱基配对的原则，按5'-3'方向合成一条与RNA模板互补的DNA单链，这条DNA单链叫做互补DNA(complementaryDNA，CDNA)。反转录酶（Reversetranscriptase）是以RNA为模板指导三磷酸脱氧核苷酸合成互补DNA（cDNA）的酶。哺乳类C型病毒的反转录酶和鼠类B型病毒的反转录酶都是...

miRNA逆转录茎环法：首先需要进行RNA样品制备，可选的方法有：离心柱法抽提（不必去除gDNA）；传统Trizol法抽提（需要去除gDNA）。miRNA正向引物：需要分别设计。是否采用通用引物视情况而定，正向引物与通用反向引物不会形成二聚体时才能用。取200ul的PCR管，根据所得每组RNA的浓度C，每孔加入1000ng总RNA，按公式1000ng/C计算出所需RNA的体积x。然后按建议的20μL反应体系说明，依次向200μL的PCR管内加入下列试剂：加样结束后，移液器吹打混匀，低速离心数秒。将逆转录PCR管放入PCR扩增仪内，调整参数：37℃15min（反转录反应），85℃5s（反转录酶的...

逆转录PCR的用途普遍，可用于分析基因的转录产物、检测细胞中RNA病毒的含量、合成cDNA探针、直接克隆特定基因的cDNA序列等。如在临床上RT-PCR可以用于遗传病诊断、病症检测、检测病人标本中的RNA病毒，如HAV、HCR、HIV等。在植物方面RT-PCR常用于研究环境胁迫对植物基因表达的影响，以及在特定的环境或生长阶段中植物体不同部位基因表达的差异性。使用RT-PCR检测分析RNA转录产物具有以下突出的优点：理论上可以检测几乎任何基因的转录产物；可以实现极为微量RNA样品（ng级别）的检测；样品耐受性好，未经纯化的粗制生物样品也可以用于检测。逆转录PCR在检测病毒、诊断疾病等方面有普遍应...

逆转录酶的合成步骤：1、使用前每个组份轻轻混匀，然后2000rpm离心20s；2、取灭过菌且无核酸酶的0.2ml离心管，依次加入2～5μgRNAnμL；3、65℃保温5min，然后冰浴5min；4、往3步骤中的0.2ml离心管依次加入下列组份：RNase抑制剂（40u/μL）0.5μL、10×M-MLVReactionBuffer2μL、DTT（200mM）1μL、逆转录酶（M-MLV）1μL；5、轻轻混匀后，然后2000rpm离心20s；6、先在37℃保温1hr，然后70℃保温15min；7、上述产物可立即进行下一步的PCR反应或-20℃保存。逆转录酶的质量控制：物理纯度：在SDS－PAGE...

逆转录酶的合成步骤：1、使用前每个组份轻轻混匀，然后2000rpm离心20s；2、取灭过菌且无核酸酶的0.2ml离心管，依次加入2～5μgRNAnμL；3、65℃保温5min，然后冰浴5min；4、往3步骤中的0.2ml离心管依次加入下列组份：RNase抑制剂（40u/μL）0.5μL、10×M-MLVReactionBuffer2μL、DTT（200mM）1μL、逆转录酶（M-MLV）1μL；5、轻轻混匀后，然后2000rpm离心20s；6、先在37℃保温1hr，然后70℃保温15min；7、上述产物可立即进行下一步的PCR反应或-20℃保存。逆转录酶的质量控制：物理纯度：在SDS－PAGE...

逆转录的作用：除了病毒外，逆转录还在其他方面发挥了重要的作用。例如，在一些动物体内，逆转录过程会导致基因的重组。这种重组可以使新的基因产生，从而使动物产生新的特征。此外，逆转录还可以作为某些基因的调节机制，从而控制基因的表达和功能。逆转录的研究一直是生物学领域的热点之一。研究人员希望通过了解逆转录酶的工作机制，从而找到一些新的方法来治着某些疾病。例如，在艾滋毒的研究中，研究人员发现了一些能够抑制逆转录酶活性的药物，从而使得病毒无法复制。这些药物已经被普遍应用于艾滋的治着中，并且取得了明显的疗效。高效的逆转录体系可提高反应效率和检测灵敏度。南京彩色逆转录试剂价格逆转录引物：加尾法逆转录引物的结构...

逆转录的转录过程：基因的转录是由RNA聚合酶催化进行的。基因的上游具有结合RNA聚合酶的区域，叫作启动子。启动子是一段具有特定序列的DNA，具有和RNA聚合酶特异性结合的位点，决定了基因转录的起始位点。RNA聚合酶与启动子结合后，在特定区域将DNA双螺旋两条链之间的氢键断开，使DNA解旋，形成单链区，以非编码链为模板合成RNA互补链的过程就开始了。转录的延长是以前面核苷酸的3′-OH为基础逐个加入NTP，形成磷酸二酯键，使RNA逐步从5′向3′端延伸的过程。在原核生物中，因为没有核膜的分隔，转录未完成即已开始翻译，而且在同一个DNA模板上同时进行多个转录过程。电镜下看到的羽毛状图形和羽毛上的小...

反转录酶(reversetranscriptase,也可写成逆转录酶)又称为依赖RNA的DNA聚合酶。1970年Temin等在致死RNA病毒中发现了一种特殊的DNA聚合酶，该酶以RNA为模板，以dNTP为底物，tRNA(主要是色氨酸tRNA)为引物，在tRNA3'-OH末端上，根据碱基配对的原则，按5'-3'方向合成一条与RNA模板互补的DNA单链，这条DNA单链叫做互补DNA(complementaryDNA，CDNA)。反转录酶（Reversetranscriptase）是以RNA为模板指导三磷酸脱氧核苷酸合成互补DNA（cDNA）的酶。哺乳类C型病毒的反转录酶和鼠类B型病毒的反转录酶都是...

逆转录的端粒复制：逆转录经常与细胞恶性转化有关，艾滋、乙肝等很多疾病也有逆转录过程。所以相关研究可以为很多疾病的研究和防治提供帮助。逆转录酶抑制剂就一直是药物研发热点，例如抗HIV的nevirapine。逆转录酶缺乏校对（3'-5'核酸外切酶）功能，所以容易出错。这也是很多病毒容易突变进化的原因，比如nevirapine就很容易被抵抗。不过，校对功能与逆转录活性并不矛盾。有人使用改良的定向进化策略从具有校对功能的DNA聚合酶（古细菌的DNA聚合酶B）进化出高保真的耐热逆转录酶，称为逆转录异种聚合酶（reversetranscriptionxenopolymerase），证明校对与逆转录是兼容的...

miRNA加尾法逆转录：miRNA，即microRNA，是一类非常短的RNA分子，只有几十到几百个核首酸，在正常细胞存活期间会产生大量的miRNA。miRNA起着重要的抑制作用，它可以抑制特定mRNA的表达以及细胞中内含物翻译和转录等功能他们是催化机制，负责影响细胞及其产物的生物学复杂性和稳定性，对于宿主机体影响是非常重要的。miRNA加尾法是一种获得miRNA及其前体的研究方法之。较重要的是，它是RNA千扰技术的一个重要组成部分。过去的研究发现，通过miRNA加尾法获得的新miRNA表达调节了细胞信号传导、细胞分裂和细胞凋亡等多重信号传递通路，其过程非常复杂。逆转录酶通常具有多种活性，如逆转...

逆转录PCR的用途普遍，可用于分析基因的转录产物、检测细胞中RNA病毒的含量、合成cDNA探针、直接克隆特定基因的cDNA序列等。如在临床上RT-PCR可以用于遗传病诊断、病症检测、检测病人标本中的RNA病毒，如HAV、HCR、HIV等。在植物方面RT-PCR常用于研究环境胁迫对植物基因表达的影响，以及在特定的环境或生长阶段中植物体不同部位基因表达的差异性。使用RT-PCR检测分析RNA转录产物具有以下突出的优点：理论上可以检测几乎任何基因的转录产物；可以实现极为微量RNA样品（ng级别）的检测；样品耐受性好，未经纯化的粗制生物样品也可以用于检测。逆转录实验过程中避免光照，防止RNA样品和试剂...

逆转录酶还有DNA内切酶活性，这可能与病毒基因整合到宿主细胞染色体DNA中有关。逆转录酶的发现对于遗传工程技术起了很大的推动作用，它已成为一种重要的工具酶。用组织细胞提取mRNA并以它为模板，在逆转录酶的作用下，合成出互补的cDNA，由此可构建出cDNA文库（cDNAlibrary），从中筛选特异的目的基因，这是在基因工程技术中较常用的获得目的基因的方法。简要过程表示：逆转录酶的作用是以dNTP为底物，以RNA为模板，tRNA(主要是色氨酸tRNA)为引物，在tRNA3'-末端上，按5'→3'方向，合成一条与RNA模板互补的cDNA单链，它与RNA模板形成RNA-cDNA杂交体。随后又在反转录...

反转录酶(reversetranscriptase,也可写成逆转录酶)又称为依赖RNA的DNA聚合酶。1970年Temin等在致死RNA病毒中发现了一种特殊的DNA聚合酶，该酶以RNA为模板，以dNTP为底物，tRNA(主要是色氨酸tRNA)为引物，在tRNA3'-OH末端上，根据碱基配对的原则，按5'-3'方向合成一条与RNA模板互补的DNA单链，这条DNA单链叫做互补DNA(complementaryDNA，CDNA)。反转录酶（Reversetranscriptase）是以RNA为模板指导三磷酸脱氧核苷酸合成互补DNA（cDNA）的酶。哺乳类C型病毒的反转录酶和鼠类B型病毒的反转录酶都是...

逆转录试剂的应用：近年来，随着基因编辑技术和基因疗法的快速发展，逆转录试剂的应用范围也在不断扩展。例如，在CRISPR-Cas9系统中，逆转录试剂可以用来进行sgRNA的合成和优化，从而提高基因编辑的效率和精度。此外，逆转录试剂还可以用来合成DNA的反义链，从而为基因疗法的开发提供技术支持。总之，逆转录试剂是一类重要的生物学试剂，它们可以促进逆转录反应的进行并在多个领域中发挥着重要的作用。在未来的研究中，逆转录试剂的应用范围将会不断扩展，并且将为生物医学研究和治着提供更多的支持。逆转录实验过程中要注意RNA样品的保存、纯化、处理和转录酶的选择。一步法反转录蛋白检测RNA逆转录实验注意事项：去除...

逆转录酶还有DNA内切酶活性，这可能与病毒基因整合到宿主细胞染色体DNA中有关。逆转录酶的发现对于遗传工程技术起了很大的推动作用，它已成为一种重要的工具酶。用组织细胞提取mRNA并以它为模板，在逆转录酶的作用下，合成出互补的cDNA，由此可构建出cDNA文库（cDNAlibrary），从中筛选特异的目的基因，这是在基因工程技术中较常用的获得目的基因的方法。简要过程表示：逆转录酶的作用是以dNTP为底物，以RNA为模板，tRNA(主要是色氨酸tRNA)为引物，在tRNA3'-末端上，按5'→3'方向，合成一条与RNA模板互补的cDNA单链，它与RNA模板形成RNA-cDNA杂交体。随后又在反转录...

大多数逆转录酶都具有多种酶活性，主要包括以下几种活性。①DNA聚合酶活性；以RNA为模板，催化dNTP聚合成DNA的过程。此酶需要RNA为引物，多为赖氨酸的tRNA，在引物tRNA3'－末端以5'→3'方向合成DNA。反转录酶中不具有3'→5'外切酶活性，因此没有校正功能，所以由反转录酶催化合成的DNA出错率比较高。②RNaseH活性；由反转录酶催化合成的cDNA与模板RNA形成的杂交分子，将由RNaseH从RNA5'端水解掉RNA分子。③DNA指导的DNA聚合酶活性；以反转录合成的首先条DNA单链为模板，以dNTP为底物，再合成第二条DNA分子。逆转录的反应条件和反应体系的优化十分重要。武汉...

反转录酶的注意事项，随机引物：适合各种RNA的RT，尤其适合模板丰度很低的情况（比如某个gene表达量很低）。选择随机引物时，首先链cDNA合成反应中就是以所有的RNA为模板，然后进行PCR反应时设计引物进行特异性扩增。同时要注意随机引物的量和总RNA量之间的关系，一般建议每5μg总RNA的随机引物的用量为50ng，如果每5μg总RNA的随机引物的用量超过250ng，可能会导致小片段产物（

RNA逆转录实验注意事项：去除基因组DNA污染：残留的基因组DNA(gDNA)会对荧光定量结果造成很大的干扰，为了使结果更加的真实、可重复，我们需要去除gDNA干扰。我们可以在引物设计时避免gDNA的扩增，比如将上下游引物分别设在不同的外显子上；或者在提取RNA后使用DNaseI处理以除去gDNA。较后，我们还有非常法宝，选择一款具有gDNA去除功能的逆转录试剂盒，一步到位去除gDNA，省心省力max。RNA逆转录实验注意事项：逆转录酶热稳定性：逆转录酶在整个反转录体系中具有关键性影响。除了活性以外，逆转录酶的热稳定性同样很重要，在较高温度下进行逆转录，能够减少RNA的二级结构，增加逆转录的效...

多逆转录酶都具有多种酶活性，DNA指导的DNA聚合酶活性；以反转录合成的首先条DNA单链为模板，以dNTP为底物，再合成第二条DNA分子。除此之外，有些反转录酶还有DNA内切酶活性，这可能与病毒基因整合到宿主细胞染色体DNA中有关。反转录酶的发现对于遗传工程技术起了很大的推动作用，目前它已成为一种重要的工具酶。用组织细胞提取mRNA并以它为模板，在反转录酶的作用下，合成出互补的DNA(cDNA)，由此可构建出cDNA文库(cDNalibrary)，从中筛选特异的目的基因，这是在基因工程技术中较常用的获得目的基因的方法。高效的逆转录体系可提高反应效率和检测灵敏度。一体化逆转录试剂RT-qPCR逆...

逆转录的发现有重要的理论意义和实践意义。对分子生物学的中心法则进行了修正和补充。经典的中心法则认为：DNA的功能兼有遗传信息的传递和表达，因此，DNA处于生命活动的中心位置。逆转录现象说明：至少在某些生物中，RNA同样兼有遗传信息传递和表达功能。修正后的中心法则表示为：是指遗传信息从DNA传递给RNA，再从RNA传递给蛋白质，即完成遗传信息的转录和翻译的过程。也可以从DNA传递给DNA，即完成DNA的复制过程。这是所有有细胞结构的生物所遵循的法则。某些病毒中的RNA自我复制和在某些病毒中能以RNA为模板逆转录成DNA的过程（某些致死病毒）。有些亚病毒例如朊病毒，这种亚病毒没有核酸，是一种因错误...

逆转录PCR的用途普遍，可用于分析基因的转录产物、检测细胞中RNA病毒的含量、合成cDNA探针、直接克隆特定基因的cDNA序列等。如在临床上RT-PCR可以用于遗传病诊断、病症检测、检测病人标本中的RNA病毒，如HAV、HCR、HIV等。在植物方面RT-PCR常用于研究环境胁迫对植物基因表达的影响，以及在特定的环境或生长阶段中植物体不同部位基因表达的差异性。使用RT-PCR检测分析RNA转录产物具有以下突出的优点：理论上可以检测几乎任何基因的转录产物；可以实现极为微量RNA样品（ng级别）的检测；样品耐受性好，未经纯化的粗制生物样品也可以用于检测。逆转录的反应机理是RNA模板上的DNA合成。南...

逆转录的发现有重要的理论意义和实践意义。对分子生物学的中心法则进行了修正和补充。经典的中心法则认为：DNA的功能兼有遗传信息的传递和表达，因此，DNA处于生命活动的中心位置。逆转录现象说明：至少在某些生物中，RNA同样兼有遗传信息传递和表达功能。修正后的中心法则表示为：是指遗传信息从DNA传递给RNA，再从RNA传递给蛋白质，即完成遗传信息的转录和翻译的过程。也可以从DNA传递给DNA，即完成DNA的复制过程。这是所有有细胞结构的生物所遵循的法则。某些病毒中的RNA自我复制和在某些病毒中能以RNA为模板逆转录成DNA的过程（某些致死病毒）。有些亚病毒例如朊病毒，这种亚病毒没有核酸，是一种因错误...

逆转录试剂在许多生物学和医学领域中都有普遍的应用。例如，在病毒学研究中，逆转录试剂可以被用来检测病毒RNA的存在和浓度。此外，在基因表达和基因调控的研究中，逆转录试剂也可以用来研究mRNA的表达模式和在细胞内的分布状态。虽然逆转录试剂在研究中发挥着重要的作用，但研究人员在选择试剂时需要考虑多种因素。例如，试剂的纯度、稳定性和活性都会影响实验结果的准确性和可重复性。此外，试剂的价格和供货渠道也是研究人员需要考虑的因素之一。逆转录酶是逆转录过程中的重要酶类。成都彩色逆转录酶供货商逆转录实验过程中要注意RNA样品的保存、纯化、处理和转录酶的选择，逆转录实验前要对反应体系进行无RNA和无反转录酶的对照...

逆转录的转录过程：基因的转录是由RNA聚合酶催化进行的。基因的上游具有结合RNA聚合酶的区域，叫作启动子。启动子是一段具有特定序列的DNA，具有和RNA聚合酶特异性结合的位点，决定了基因转录的起始位点。RNA聚合酶与启动子结合后，在特定区域将DNA双螺旋两条链之间的氢键断开，使DNA解旋，形成单链区，以非编码链为模板合成RNA互补链的过程就开始了。转录的延长是以前面核苷酸的3′-OH为基础逐个加入NTP，形成磷酸二酯键，使RNA逐步从5′向3′端延伸的过程。在原核生物中，因为没有核膜的分隔，转录未完成即已开始翻译，而且在同一个DNA模板上同时进行多个转录过程。电镜下看到的羽毛状图形和羽毛上的小...

逆转录（reversetranscription）是以RNA为模板合成DNA的过程，即RNA指导下的DNA合成。此过程中，核酸合成与转录（DNA到RNA）过程与遗传信息的流动方向（RNA到DNA）相反，故称为逆转录。逆转录与反转录严格意义上来说没有什么区别，但是逆转录是某些病毒的自主行为，如逆转录病毒，它们在整合到宿主细胞内前以RNA为模板形成DNA的过程；反转录是进行基因工程过程中，人为地提取出所需要的目的基因的信使RNA，并以之为模板人工合成DNA的过程。二者虽同为RNA→DNA的过程，但地点不同，相对性的来说，逆转录在体内，反转录在体外。逆转录实验过程中需要考虑RNA模板质量和RNA纯化...

RNA逆转录实验注意事项：RNA定量：除了掌握RNA的完整性之外，反转录之前还需要对RNA浓度进行测定。一般反转录试剂盒会对上样量有要求，建议totalRNA上样量小于5μg。超过这个范围，会使反转录产物产生偏好性(表达丰度高的基因优先被反转录)而造成定量结果不准确。逆转录引物的选择：逆转录引物一般包含3种：oligodT引物，随机引物和特异性引物。对于短的且不具备发卡结构的真核细胞mRNA，三种都可用。逆转录实验过程中避免光照，防止RNA样品和试剂受光降解或刺激。逆转录技术可以进行从RNA到DNA的转化，从而保护RNA序列的完整性。杭州一体化逆转录酶多少钱逆转录试剂在许多生物学和医学领域中都...

逆转录实验的准备工作：1、实验器具与材料：（1）移液头：200ul、10ul；（2）吸头：200ul、20ul；（3）EP管1。5ml、100ul；（4）水浴箱。2、实验器具的处理与准备，塑料制品：（包括吸头、EP管等）将塑料制品逐个浸泡于1‰DEPC水中（必要时小头头需要用吸管打入DEPC水）37℃过夜，然后送至高压3次，后在80℃烘烤箱中烘干（或置于37℃中8小时左右烘干），试验前将头头放入吸头台。3、试剂配制和准备：（1）DEPC水：泡实验器具的DEPC水的配制：1000ml双蒸水中加1mlDEPC，放在1000ml容量瓶中静置4小时后备用。逆转录中所用的DEPC水的配制：100ml盐水...

逆转录的过程：生物体中的逆转录过程就比较复杂，比如逆转录病毒（retrovirus）。病毒是真正的“极简风”，所有东西都压缩到非常。比如它的基因组中，经常有些基因是重叠、嵌套结构，充分利用每一个碱基。所以它也不会专门编码一个引发酶来合成引物，它一般是在组装时带走宿主的tRNA，在下次侵染时当作引物使用。被用作引物的tRNA会结合在病毒基因组RNA链的中间，所以首先次只能合成出一部分cDNA，然后利用基因组RNA两端的一段重复序列，“跳”回另一端，完成整条链的逆转录。之后水解RNA链的时候，会留下一些片段作为复制的引物。双链DNA的合成同样也需要经过一次跳跃（jump），以合成完整双链。较后两端...

RT-PCR逆转录引物设计原则：1.上下游引物要保守：扩增子长度需选择一段保守片段（100-200bp）进行PCR扩增，选择片段需跨越内含子，因内含子的基因组DNA序列不会被扩增，也可减少从污染的基因组DNA中扩增得到的假阳性风险。引物选取同样需要保守。2.引物长度和Tm值：引物设计长度为18-25bp，Tm值在50-65℃之间，引物中GC含量在40-60%。设计引物时尽量避免出现4个或超过4个G碱基。RT-PCR实验阴性对照：反转录阴性对照应包括在所有的RT-PCR的实验中，用来检测DNA是否污染（如基因组DNA或PCR产物）。该对照所指不加反转录酶，通过反转录过程得到cDNA在进行荧光定量...