四川高灵敏度数字PCR专业服务

来源: 发布时间:2021-10-14

微生物(病毒、细菌等)的检测:疾病预防控制中心、出入境检验检疫局系统的实验室可以将基于TaqMan探针法的定量PCR体系无缝地转移到数字PCR上,从而满足该类实验室对于检测结果的要求:灵敏度更高、重复性更好、无需依赖标准曲线的***定量结果。其他应用:数字PCR还可以用于转基因成分的检测、移植排斥监控、肠道菌群分析以及药物基因组检测等领域。随着数字PCR荧光通道的增加和多指标检测的成熟,数字PCR将会进入更多应用领域,有力推动生命科学、医学诊断、检验检疫、农业等领域的快速发展。开发多靶点检测的多重数字PCR检测,可以通过多种荧光染料或标记技术来实现。四川高灵敏度数字PCR专业服务

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尽管dPCR被称作第三代PCR技术,但dPCR技术的广泛应用逐渐显现出一些不足之处。通量不高、操作复杂,同时成本**增加,dPCR似乎还没有找到相对qPCR足够的不可取代性优势。另一方面,dPCR增加了很多技术难点,如何制作成本低廉的芯片,如何集成液滴生成和PCR扩增,如何进行灵敏的信号检测和分析,如何提高自动化程度,实现Sample-In Result-Out。相较于Digital ELISA能够提高免疫检测的灵敏度到fg/mL级别,实现了高敏蛋白的检测,dPCR尽管发展更早,却难以取得Killer Application,或许这也导致了所谓的第三代PCR在很多人看来却没那么“下一代”。湖北Digital PCR数字PCR怎么样数字PCR技术为基因表达分析提供了高精确的定量分析方法。

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QuantaLife 利用油包水微滴生成技术 开发了微滴式数字PCR技术,这也是**早出现的相对成熟的数字PCR平台,在运行成本和实验结果稳定性方面都基本达到了商品化的标准。2011年,QuantaLife 公司被Bio-Rad公司收购,其微滴式数字PCR仪产品更名为QX100型号仪继续在市场上销售,这个早期型号为dPCR概念的普及和应用领域的拓展发挥了重要作用。2013年该公司又推出了升级型号QX200。2012年,RainDance公司推出Raindrop型号数字PCR设备,这个设备将其原有的二代测序文库制备平台技术平移到数字PCR技术平台,在高压气体驱动下,将每个标准反应体系分割成包含100万至1000万个皮升级别微滴的反应乳液, 该公司的创始人之一Darren Link表示这种超高的微滴数目可以为用户“提供更高的检测动态范围,适用于处理更大浓度差异的不同样品”。

20 世纪末,Vogelstein等提出数字PCR(digital PCR,dPCR) 的概念,通过将一个样本分成几十到几万份,分配到不同的反应单元,每个单元包含一个或多个拷贝的目标分子( DNA 模板) ,在每个反应单元中分别对目标分子进行PCR扩增,扩增结束后对各个反应单元的荧光信号进行统计学分析。与 qPCR 不同的是,数字PCR不依赖于CT值,因此不受扩增效率影响,扩增结束后通过直接计数或泊松分布公式来计算每个反应单元的平均浓度(含量),能够将误差控制在5%以内,数字PCR 可以不需要对照标准样品和标准曲线来实现***定量分析。常见的300种人、小鼠和大鼠基因表达Assay均已在QIAcuity数字PCR平台上经过验证。

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肺*的EGFR突变检测:EGFR突变目前已成为非小细胞肺*(Non-Small-Cell Lung Cancer,NSCLC)患者常规的伴随诊断,对于EGFR酪氨酸激酶抑制剂(TKI)的使用具有重要的指导作用。然而,由于多数NSCLC都处于晚期,很难取到足够的**组织完成该检测,不方便对患者的疗效和耐药情况进行动态监测。相反,血液、胸水以及脑脊液之类的体液标本中会含有**来源的DNA(Circulating tumor DNA,ctDNA),它们更容易获取,被认为是组织标本的有效替代品。由于体液标本中ctDNA的含量非常低,因此对检测方法提出了很高的要求。近年来,有研究者证实,数字PCR的检测敏感性可以低至0.04%,EGFR突变的血浆检测与组织学检测能够有很好的吻合性,相比于传统的检测方法,数字PCR可以***提高血浆中EGFR突变的检出率。此外,利用数字PCR***定量的优势,可以对血浆中EGFR突变的丰度进行动态监测,这种动态变化与患者使用TKI的疗效密切相关,可以更好的指导患者的***。随着越来越多循证医学证据的出现,NSCLC的血液EGFR突变检测正在成为ddPCR相当有前景的应用方向。需要对反应体系进行拆分和分配。四川高灵敏度数字PCR专业服务

影响引物探针特异性的因素有很多种,譬如纯化方式、设计方法以及引物探针的修饰技术等。四川高灵敏度数字PCR专业服务

数字PCR(Digital PCR-dPCR)技术是一种新的核酸检测和定量方法,与传统定量PCR(qPCR)技术不同,数字PCR采用***定量的方式,不依赖于标准曲线和参照样本,直接检测目标序列的拷贝数。由于这种检测方式具有比传统qPCR更加出色的灵敏度和特异性、精确性,dPCR迅速得到***的应用,这项技术在极微量核酸样本检测、复杂背景下稀有突变检测和表达量微小差异鉴定方面变现出的优势已被普遍认可,而其在基因表达研究、microRNA研究、基因组拷贝数鉴定、**标志物稀有突变检测、致病微生物鉴定、转基因成分鉴定、NGS测序文库精确定量和结果验证等诸多方面具有的广阔应用前景已经受到越来越多的关注。四川高灵敏度数字PCR专业服务