small RNA高通量测序原理

来源: 发布时间:2022-08-16

什么是KBSeq全质粒测序?它基于第二代测序技术,一次性对大量质粒(比较多可达6000个样本)进行并行测序,利用生物信息学分析,对数据进行序列组装并获得每一个质粒的完整序列信息。所以我们也称它为,可以部分替代一代测序的高通量测序技术。测序长度:对于测序长度较长,如果我们用Sanger测序往往需要花费大量的时间,而我们KBSeq全质粒测序则只需要5-7天,就可以测通片段长度小于30kb以下的片段。样本用量:KBSeq全质粒测序对于样本的量,要求的也比较少,比如质粒我们的样本要求DNA的浓度需≥ 1 ng/μl, 体积需≥5 μl,如果比较珍贵的样本或者是样本比较难提取的,KBSeq就更为适合了。截止目前为止,生工生物可是为数不多的同时拥有ChromiumController和ChromiumX平台的公司。small RNA高通量测序原理

small RNA高通量测序原理,高通量测序

生工外显子测序,项目介绍:已知人类基因组上有180000个外显子,占整个基因组约1-2%。这些区域主要负责编码蛋白。绝大多数的单基因遗传突变与复杂疾病突变都发生在外显子区域。相比于全基因组重测 序,全外显子捕获测序有测序深度高、价格便宜的优势,性价比很高。生工生物采用Aglient SureSelect系列外显子捕获系统,可以高效富集人全外显子区域,并结合Illumina XTen测序平台进行深度测序。后期可以完成SNP/InDel/CNV等变异检测,形成完整的分析报告。上海多重PCR高通量测序服务特别申明:不能采用过柱离心的方法提取总RNA。

small RNA高通量测序原理,高通量测序

悬液制备好后质检结果的判断也是大家需要掌握的必备技能。单细胞悬液质检关卡究竟是怎样运作的呢?单细胞悬液质控要求:•细胞浓度:700-1200cells/µl;•细胞活率>80%(当细胞悬液活率低于70%时建议进行去除死细胞处理);细胞团及碎片杂质<5%(无细胞粘连,无明显的细胞碎片和细胞团,并保证细胞的完整性);•细胞状态:细胞直径在7-40um之间(细胞直径过大则建议进行抽核处理);•不存在逆转录抑制剂和非细胞的核酸分子。

怎样通过血球计数板进行质检操作呢?将血球计数板擦拭干净,取干净的盖玻片盖在计数板上;将细胞悬液混匀(或10µl台盼蓝+10µl细胞悬液),吸出10µl悬液至计数板上盖玻片的一侧使细胞核悬液铺满盖玻片和计数板之间;在显微镜下分别对V1/V2/V3/V4四个计数区域进行计数;按细胞计数公式进行计算,计算公式:细胞总数={(V1+V2+V3+V4)/4}*10000*悬液体积*稀释倍数,V1/V2/V3/V4为各个计数区的细胞数目,细胞活率=活细胞数目/总细胞数目*100%。RNA样品建议用足量干冰运输。

small RNA高通量测序原理,高通量测序

台盼蓝染色原理:台盼蓝染色原理:台盼蓝不能透过活细胞正常完整的细胞膜,故活细胞不被染色。而死细胞的细胞膜透性增高,可使染料进入细胞内而使死细胞染成淡蓝色。

通过显微镜使用血球计数板质检得到质检结果:明场(细胞未染色):主要可以观察悬液背景质量(背景干净,无杂质碎片,无细胞团块);台盼蓝场(细胞与台盼蓝染色后):主要可以观察活性(主要为活细胞,未染色蓝色的为活细胞);通过台盼蓝场计算活率:90%>80%;细胞浓度:710cells/µl;等结果来看,血球计数板质检结果的展示可以看出所有指标均符合上机标准,属于高质量单细胞悬液。 DNA样品请用1.5 mL离心管装好并用封口膜封好,并安置于50 mL离心管内或其他类似容器里,并旋紧盖子。上海多重PCR高通量测序服务

DNA样品建议用蓝冰运输。small RNA高通量测序原理

单细胞悬液质检方法,在进行单细胞悬液质检时,需要用到以下两大质检利器的辅助:荧光细胞计数仪(主要使用台盼蓝和双荧光AO/PI染色法)进行质检。首先我们先要了解一下细胞质检时染料染色的原理:台盼蓝染色原理:台盼蓝不能透过活细胞正常完整的细胞膜,故活细胞不被染色。而死细胞的细胞膜透性增高,可使染料进入细胞内而使死细胞染成淡蓝色。荧光细胞计数仪检测结果可以让我们直观的看到:细胞浓度(总细胞,活细胞,死细胞)、细胞存活率(台盼蓝和双荧光AO/PI染色)、细胞平均直径、细胞聚团率、细胞直径分布等结果的展示。small RNA高通量测序原理

生工生物工程(上海)股份有限公司致力于医药健康,是一家生产型公司。公司自成立以来,以质量为发展,让匠心弥散在每个细节,公司旗下生化试剂,实验耗材,实验试剂,研发深受客户的喜爱。公司从事医药健康多年,有着创新的设计、强大的技术,还有一批专业化的队伍,确保为客户提供良好的产品及服务。生工生物凭借创新的产品、专业的服务、众多的成功案例积累起来的声誉和口碑,让企业发展再上新高。

标签: 高通量测序