合肥上清外泌体分离蛋白检测

来源: 发布时间:2023-07-20

当外泌体在1983年头次被发现后,其被认为是细胞排泄废物的一种方式,如今随着大量对其生物来源、其物质构成及运输、细胞间信号的传导以及在体液中的分布的研究发现外泌体具有多种多样的功能。外泌体的功能取决于其所来源的细胞类型,其可参与到机体免疫应答、抗原提呈、细胞迁移、细胞分化、疙瘩侵袭等方方面面。有研究表明疙瘩来源的外泌体参与到疙瘩细胞与基底细胞的遗传信息的交换,从而导致大量新生血管的生成,促进了疙瘩的生长与侵袭。外泌体分离器材的选择也对分离结果有一定的影响。合肥上清外泌体分离蛋白检测

外泌体衍生物miRNA的重要应用:miRNA是一类主要的小分子、单链、非编码RNA分子,其成熟形式的长度在20到22个核苷酸(NT)之间,在几乎所有生物途径中发挥重要作用,包括细胞生长、增殖、分化、免疫反应,细胞凋亡,代谢和疙瘩发生。外泌体在体液中的主要作用是可以保护miRNA,防止其生物分子在非生理条件下(多次冻融循环、长期储存和极端pH)降解。据报道,外泌体来源的miRNA在-20°C下可保持稳定长达5年,并且对冻融循环具有抵抗力.这也使外泌体成为病症和其他疾病的潜在生物标志物。miRNA与包括病症在内的许多疾病的发病机制有关,并且还被证明被远端或附近的受体细胞吸收作为外泌体中的货物,作为细胞间通讯的一种方法,可能会影响发病机制。所以,外泌体可以被看作是miRNA转移至目标受体细胞的载体。常州外泌体分离分离外泌体后需要通过电镜等方式进行鉴定。

分离外泌体的方法之超滤:它使用孔径为50-450nm的膜过滤器从细胞碎片和较大的EV中分离外泌体。通过使用纳米尺寸的滤膜,可以分离出目标尺寸的外泌体。超滤法通常用作超速离心的后续步骤,以及凝胶过滤和色谱的较后一步。超滤可以通过切向流过滤(TFF)或直流过滤(DFF)方法进行处理。DFF方法也称为死端过滤,存在膜污染和颗粒分离受损的问题。此外,DFF只适用于小体积样品,例如高达30mL的样品。TFF也称为错流过滤是一种更快速、高效和方便的分离大规模外泌体体积的过程,TFF是样品流体切向流过滤膜并避免形成滤饼或堵塞的过程。

在生物流体中发现的细胞外囊泡包括来自内体,多泡体的细胞外泌体(30nm至150nm)和来自质膜的微泡(150nm至1000nm)。目前已知有多种从生物体液中分离外泌体的方法除了使用高速离心机的离心分离法以外,还有色谱法、超滤过滤法、基于聚合物的沉淀和免疫分离法等。#外泌体干细胞#这些细胞外泌体分离方法提取的外泌体要警惕非外泌体颗粒污染,如凋亡小体、凋亡小囊泡、外泌体和脂蛋白,均会对获得的外泌体生物活性产生影响。另外,分离方法也会影响细胞外泌体的纯度和产量。如果要从培养基中分离外泌体,就要使用无血清培养基或无外泌体胎牛血清。外泌体分离方法的优化需要对比不同方法的纯度和收率。

对于外泌体的标记和鉴定,获得外泌体之后,如何对其进行鉴定又是一个困扰研究者的问题。国际细胞外囊泡学会(ISEV)在2014年提议,对于分离获得的外泌体需要从三个层面进行鉴定:WB检测外泌体标志蛋白表达情况:外泌体膜上富含参与外泌体运输的跨膜蛋白家族(CD63/CD81/CD9)、热休克蛋白家族(HSP60/HSP70/HSPA5/CCT2/HSP90)和一些细胞特异性蛋白。其中CD63/TSG101是较常用到的外泌体标志物。TEM鉴定外泌体形态:电镜具有较高的分辨率,可以直接观察到样品中外泌体的形态。NTA检测外泌体粒径及浓度:TEM可以观察外泌体的形态学特征,但无法体现样本中所有外泌体的粒径分布情况及整体浓度。NTA(NanoparticleTrackingAnalysis)技术可快速准确地分析外泌体的粒径分布及浓度,为外泌体鉴定提供有力证据。可将不同分离方法结合使用,以提高外泌体分离的效率和分离精度。广州外泌体多少钱

外泌体在疙瘩微环境中的参与,反映了其具有的高度的异质性和复杂性。合肥上清外泌体分离蛋白检测

外泌体分离方法之尺寸排阻色谱分离法:尺寸排阻色谱(SEC)用于根据尺寸而非分子量分离大分子。该技术应用了一种填充有多孔聚合物珠子的柱子,该珠子含有多个孔和隧道。分子根据它们的直径穿过珠子。小半径分子通过色谱柱的孔迁移需要更长的时间,而大分子从色谱柱中洗脱得较早。尺寸排阻色谱可以精确分离大分子和小分子。此外,该方法可以应用不同的洗脱溶液。与离心机离心方法相比,色谱分离具有较多的优势,因为通过色谱分离的外泌体不受剪切力的影响,避免了因剪切力所造成的囊泡结构改变。目前,SEC是一种普遍接受的分离血液和尿液中存在的外泌体的技术。此外,SEC方法与超滤相结合已用于分离和分析尿源性外泌体。此外,流场-流分馏结合紫外分析仪和光散射检测器已被应用于分析外泌体的大小和纯度。流场-流分馏结合抛物线和交叉流来分离外泌体。获得的外泌体已通过电子显微镜和质谱检测。合肥上清外泌体分离蛋白检测

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