快速提取外泌体生产厂家

来源: 发布时间:2023-11-09

外泌体可以传递生物分子,例如蛋白质、DNA、mRNA等,影响接收器细胞的表现型和生理活性。外泌体可通过特定的组装和功能修饰,提高其对宿主细胞的选择性靶向性。核酸是在外泌体中发现的另一组主要颗粒,即DNA和RNA,它们可以在细胞中发挥功能作用。在源自小鼠和人类肥大细胞的外泌体中发现了约1300种mRNA、121种miRNA和>100种小RNA,但未检测到DNA和rRNA。在外泌体中发现的其他miRNA是lin-4和let-7,以及母乳中的miR-181a和miR-155。小鼠外泌体对人类细胞的刺激可以导致人类细胞中小鼠蛋白质的合成。此外,外泌体和受体细胞的mRNA谱不同,表明mRNA被主动分选为MVB。未来可开发更加高效和精确的外泌体分离和检测技术。快速提取外泌体生产厂家

差速离心法分离外泌体的实验原理:与等密度和梯度离心相反,差速离心从离心管内颗粒的均匀初始分布开始。在开始一轮离心过程中,位于管底部附近的一部分目标小颗粒不可避免地与较大颗粒共同沉淀。这种共沉淀导致较小颗粒的产量降低。然而,选择大颗粒,起初位于管半月板附近,在开始一轮离心过程中可能没有足够的时间到达管底,从而污染较后一个离心步骤产生的小颗粒颗粒。显然,交叉污染的程度取决于不同粒子群的相对沉降速度和离心条件。在被分离的粒子的沉降速度之间存在显着(数量级)差异的情况下,可以有效地优化差速离心协议以获得目标粒子群的高产量和足够纯度。此外,当不同颗粒部分之间的沉降速率只存在微小差异时,优化过程不太成功。在这些情况下,取决于离心条件。合肥血液DNA外泌体外泌体与胚胎学密切相关,参与人类胚胎发育和胚胎起始过程中的各种调节作用。

CHO细胞外泌体的分离和表征:CHO细胞是一种普遍用于生物制药蛋白质生产的宿主。CHO细胞中分离外泌体主要采用聚合物的沉淀(PBP)技术从分批培养中分离和富集细胞外泌体囊泡。分离后的外泌体可以通过多种方法来检测和表征分离的囊泡,这些分析包括动态光散射(DLS)和Zeta电位测量、电子显微镜(EM)和外泌体标记物分析、RNA和脂质分析等。根据制造商的指南,使用TEI总外泌体分离试剂盒(Invitrogen)从培养基中分离外泌体。将细胞培养基以2000×g离心30分钟以去除细胞和任何碎片;随后将上清液小心移至离心管管中,加入0.5倍体积的TEI试剂,充分混合并在4°C下孵育过夜。然后将样品在4°C下以10,000×g离心1小时,然后在弃去上清液后,将富含外泌体的颗粒重新悬浮在75μlPBS缓冲液中。然后将样品储存在-20°C下,直到需要进行后续分析。

外泌体的表征方法:根据药物递送系统(DDS)表征外泌体结构至关重要,因为它决定了DDS的特性,例如细胞或组织亲和力、应激反应、吸收途径和药物释放。2014年和2018年国际细胞外囊泡学会(MISEV2018)提出了外泌体(包括研究和外泌体制备)应满足的基本要求指南。在开发基于外泌体的DDS时,必须考虑数量、大小、形态、膜组成和蛋白质(包括受体)等参数。这些参数表征所用的技术主要为光学、非光学和微流体技术。外泌体的表征方法之非光学方法:FTIR光谱和衰减全反射FTIR(ATR-FTIR)常用于外泌体质量量化和脂质和蛋白质含量的总体估计。使用TRPS,可以同时测量大小、浓度和zeta电位。由于扫描电子显微镜(SEM)、透射电子显微镜的成本较高,近些年来,一种新型的纳米粒度分析仪器在外泌体研究领域迅速发展,比如:粒度分析仪可以不只可以进行单颗粒检测,颗粒粒径检测还可以检测细胞外泌体的浓度、zeta电位、形态等进行多维度检测。外泌体可通过特定的组装和功能修饰,提高其对宿主细胞的选择性靶向性。

人体内多种细胞及体液均可分泌外泌体,包括内皮细胞、免疫细胞、血小板、平滑肌细胞等。当其由宿主细胞被分泌到受体细胞中时,外泌体可通过其携带的蛋白质、核酸、脂类等来调节受体细胞的生物学活性。外泌体介导的细胞间通讯主要通过以下三种方式:一是外泌体膜蛋白可以与靶细胞膜蛋白结合,进而靶细胞细胞内的信号通路。二是在细胞外基质中,外泌体膜蛋白可以被蛋白酶剪切,剪切的碎片可以作为配体与细胞膜上的受体结合,从而打开细胞内的信号通路。有报道称一些外泌体膜上蛋白在其来源细胞膜上未能检测出。三是外泌体膜可以与靶细胞膜直接融合,非选择性的释放其所含的蛋白质、mRNA以及microRNA。外泌体分离器材的选择也对分离结果有一定的影响。青岛上清外泌体分离报价

外泌体可作为一种疙瘩标志物进行检测,通过其生物学特征进行诊断和治着。快速提取外泌体生产厂家

外泌体的分离方法:目前,有许多可用的外泌体分离方法。比较传统的外泌体分离方法是超速离心,许多人将其视为金标准。其他技术主要基于大小排阻或抗体介导的标记外泌体分离。每种分离方法在纯度、数量、效率和通量方面都不同。超速离心法分离法的缺点是外泌体结构容易发生改变,造成外泌体的结构不一致性甚至会导致外泌体受损。超滤法:超滤法使用的是微孔过滤器;因此,较大的颗粒将从滤液中排除。它可以与离心结合使用,通过初步去除细胞碎片等大颗粒来加速外泌体的纯化。不过使用此方法需要防止孔隙堵,不适合大规模的样本处理。快速提取外泌体生产厂家